Этот набор основан на методе Циля-Нильсена, рекомендованном ВОЗ, и представляет собой химическое пятно, предназначенное для выявления кислотоустойчивых бактерий, таких как Mycobacterium tuberculosis.
Принцип действия:
Кислотообразующие бактерии, такие как Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium leprae, трудно поддаются окрашиванию из-за наличия липоидной капсулы в клеточной стенке. Однако после окрашивания липоидной капсулы усиленным красителем, таким как карболфуксин, вновь образовавшееся соединение будет сопротивляться обесцвечиванию спиртовой кислотой и сохранит первоначальный цвет окраски (красный), что позволяет легко отличить его от других микроорганизмов, которые по-прежнему адсорбируют контрастное синее окрашивание. Фенол является протравой и способен улучшить окрашивающую способность.
Методы:
1. Депарафинируйте ткань, добавьте карболфуксин, нагрейте на небольшом огне и держите пятно на пару в течение 5~10 минут. Избегайте выпаривания до сухого состояния или кипячения.
2. После охлаждения осторожно промойте водой. Осторожно промокните предметное стекло бибулярной бумагой.
3. Обесцветьте в течение 1~2 минут кислым спиртом.
4. Осторожно промойте водой (если на поверхности образца все еще виден красный цвет, добавьте кислотный спирт еще раз до полного обесцвечивания. Затем продолжайте промывать водой).
5. Нанесите метиленовый синий на 20-30 секунд. Аккуратно промойте водой.
6. Дифференцируйте в 95% этаноле в течение 5~10 секунд.
7. Обезвожьте в абсолютном этаноле и очистите ксилолом. Закрепите с помощью монтажной среды.
8. В качестве альтернативы вышеуказанный этап обезвоживания можно заменить сушкой на воздухе.
9. Рассмотрите готовый слайд под объективом с масляной иммерсией.
---