Препарат для подготовки цитогистологических образцов для оптической микроскопии.
Применение
Криостатные срезы 8 мкм скелетной мышцы человека. Для демонстрации ферментативной активности кислой фосфатазы.
Кислая фосфатаза находится в макрофагах и лизосомах, она определяет некроз и регенерацию.
Принцип Результаты Кислый фосфат нафтола гидролизуется кислыми фосфатазами, присутствующими в тканях, и образуются производные нафтола. Производные нафтола соединяются с нестабильной солью диазония, гексазонием парарозанилина, и образуют красный азокраситель, который маркирует места активности фермента.
Метод
1) Перед началом процедуры рекомендуется дать реагентам нагреться до комнатной температуры.
2) Секция в фиксаторе для кислой фосфатазы (Bio-Optica, код 30-30120), 10 минут
3) Высушить на воздухе, 10 минут
4) Приготовление инкубационного раствора: - добавьте реагент В в реагент С. Встряхните 5-10 секунд и дайте постоять 1 минуту. - поместите содержимое пробирки A в реагент D. Встряхните 5-10 секунд. - добавьте раствор B+C в раствор A+D. Встряхните 5-10 секунд.
5) Инкубируйте срезы при 37°C, 45 минут.
6) Промыть в дистиллированной воде, 10 минут
7) Метиловый зеленый (Bio-Optica, код 30-30119), 5 минут
8) Промыть в дистиллированной воде
9) Закрепите в водных монтажных средах. В качестве альтернативы быстро обезвоживайте спирты до ксилола и монтируйте в смолистые монтажные среды.
Положительная ферментативная активность кислой фосфатазы: красный
Результаты
Фон и ядро: зеленый
---