Для количественного определения аланин-аминотрансферазы в сыворотке крови.
МЕТОДОЛОГИЯ
Международная федерация клинической химии (IFCC) в 1980 году опубликовала предложенный рекомендуемый метод, использующий сопряженный анализ LDH-NADH. Процедура, описанная в настоящем документе, основана на этом методе.
Принцип
АЛТ катализирует перенос аминогруппы с L-аланина на -кетоглутарат, что приводит к образованию пирувата и L-глутамата. Лактатдегидрогеназа катализирует восстановление пирувата и одновременное окисление NADH до NAD. Скорость снижения абсорбции прямо пропорциональна активности АЛТ.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Приготовьте рабочий реагент, смешав 4 части реагента R1 с 1 частью реагента R2.
(Например, 200 мкл R1 с 50 мкл реагента R2)
ПОРЧА РЕАГЕНТА
Не используйте реагент, если:
1. Начальная абсорбция при 340 нм ниже 0,8.
2. Реагент не соответствует заявленным параметрам эффективности.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Данный набор реагентов предназначен только для диагностики in vitro.
2. Реагент R1 содержит азид натрия в качестве консерванта. Не употреблять внутрь.
СБОР И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
1. Рекомендуется использовать негемолизированную сыворотку. Красные клетки содержат АЛТ, которая может дать ложно повышенные результаты.
2. АЛТ в сыворотке стабилен в течение трех дней при комнатной температуре (15-30°C), 1 недели при 4°C.
ПРОЦЕДУРА
Длина волны: 340 нм
Тип анализа: кинетический
Направление реакции : Уменьшение
Температура : 37°C
Оптический путь : 1 см
1. Доведите до комнатной температуры (15 -30 °C)
2. Установите фотометр на 0 (ноль) с помощью дистиллированной воды
3. Перемешайте и инкубируйте при 37 °C
4. Через 60 секунд прочтите и запишите значение абсорбции
5. Переключите пробирку на 37 °C.
---