Прокладывает путь к функциональному анализу конкретного исследовательского вопроса.
Предполагаемое использование
Данный набор FluoroSpot Path предназначен для подсчета В-клеток, секретирующих IgG человека в ответ на SARS-CoV-2 (Spike и RBD), с помощью анализа FluoroSpot. Также могут быть подсчитаны В-клетки, секретирующие IgG независимо от антигенной специфичности (общий IgG). Только для исследовательских целей. Не для использования в диагностических процедурах.
Для получения В-клеток памяти рекомендуется предварительная стимуляция с помощью R848 и рекомбинантного человеческого IL-2 (оба включены).
Производительность
КМП человека от больного COVID-19 инкубировали с R848+IL-2 (стимулирует В-клетки памяти) в пробирках в течение трех дней. Затем клетки тщательно промывали и добавляли в планшет FluoroSpot (250 000 клеток/лунку), покрытый античеловеческими IgG mAbs. Пятна IgG, специфичные для Spike, выявляли с помощью Spike-GAL, т.е. рекомбинантного белка Spike с пептидной меткой GAL, а затем анти-GAL-490. Пятна, специфичные для RBD, выявляли с помощью RBD-WASP, т.е. рекомбинантного белка Receptor Binding Domain с пептидной меткой WASP, а затем анти-WASP-640. Пятна анализировали с помощью программы Mabtech IRIS.
Описание аналитов -
Иммуноглобулин G (IgG) - наиболее распространенный изотип Ig в сыворотке крови, составляющий около 80 % всех сывороточных иммуноглобулинов. У людей существует четыре подкласса иммуноглобулина G, при этом наибольшая концентрация в сыворотке приходится на IgG1, за которым следуют IgG2, IgG3 и IgG4. У мышей подклассы IgG определяются как IgG1, IgG2a/c, IgG2b и IgG3. Молекула IgG состоит из двух тяжелых и двух легких цепей (κ или λ), в результате чего молекула имеет два плеча для связывания антигена.
---