Набор реактивов обратная транскриптаза RScript™

красительдля синтеза cDNA

Данный набор разработан на основе обратной транскриптазы RScript II, которая использует праймер обратной транскрипции со структурой "стебель-петля", связывающийся с 3' концом молекулы миРНК. Под действием обратной транскриптазы RScript II получается искусственно удлиненная кДНК первой линии миРНК. Рекомендуемая общая последовательность стволовой петли - 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3'; другие последовательности стволовой петли также могут быть выбраны в соответствии с экспериментальными потребностями. Как правило, праймеры для обратной транскрипции должны добавлять только 6 обратных, комплементарных оснований на 3' конце миРНК к последовательности стебель-петля. Этот метод высокоспецифичен и осуществляет обратную транскрипцию только зрелых миРНК, не подвергаясь вмешательству предшественников. МиРНК с высоко гомологичными последовательностями могут быть точно выделены. Продукты обратной транскрипции, полученные с помощью данного продукта, могут быть непосредственно использованы для последующего количественного определения с помощью красителей или зондов. Тест на чувствительность RK004-0050 RK004-0050 был протестирован с различными концентрациями (1000 нг, 100 нг, 10 нг, 1 нг, 0,1 нг, 0,01 нг) РНК клеток Hela в качестве шаблонов, нацеленных на ген has-mir16-5p. Кривые амплификации продемонстрировали чувствительность на уровне 10 пг общей РНК Эффективность амплификации RK004-0050 на шаблонах из разных источников (A) РНК клеток Hela (B) РНК мыши RK004-0050 использовали с различными концентрациями (1000 нг, 100 нг, 10 нг, 1 нг, 0,1 нг) РНК клеток Hela и РНК мыши в качестве шаблонов. Амплификационные кривые для различных миРНК показали отличную производительность для Human-U6, has-mir16-5p, has-mir221-3p, Mouse-U6, mmu-mir-5p, mmu-mir24-3p и др.