Измерения уровней экспрессии мРНК - будь то Северный анализ, защита рибонуклеазой или количественная ПЦР в реальном времени - обычно стандартизируются путем сравнения данных с данными, полученными для внутреннего или эндогенного референсного гена. Чаще всего используются гены домашнего хозяйства, такие как бета-актин и глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (GAPDH), поскольку предполагается, что уровень их экспрессии остается постоянным при различных условиях обработки. К сожалению, это предположение не всегда справедливо, и результаты, основанные только на генах домашнего хозяйства, могут быть необъективными (Suzuki, Higgins, and Crawford 2000). Более эффективным методом является нормализация данных с помощью нашей эталонной кДНК qPCR Human - единственного кДНК-контроля, полностью полученного из тканей человека.
эталонная кДНК qPCR Human - идеальный контроль для сравнения данных, полученных в разных экспериментах количественной ПЦР (qPCR). Поскольку она приготовлена из общего пула РНК, собранного из нескольких различных тканей, наша эталонная кДНК qPCR Human обеспечивает широкий охват генов, что подтверждается микрочиповым анализом исходного материала РНК. РНК, а значит, и кДНК, приготовленная из целых тканей, обеспечивает лучшее представление генов с меньшим разбросом, чем РНК, полученная из клеточных линий (данные не показаны). Более того, ПЦР-анализ показывает, что наша тотальная РНК практически не содержит геномной ДНК. Это позволяет более точно измерять число копий транскриптов. В РНК хорошо представлены как гены с высокой, так и с низкой концентрацией, что позволяет готовить широкий спектр серийно разводимых стандартов для каждого анализа методом qPCR. Разброс между партиями эталонной кДНК минимален, поскольку источник РНК готовится в промышленных масштабах.
---