Измерение уровня экспрессии мРНК - будь то с помощью Северного анализа, рибонуклеазной защиты или количественной ПЦР в реальном времени - обычно стандартизируется путем сравнения данных с данными, полученными для внутреннего или эндогенного референсного гена. Чаще всего используются гены домашнего хозяйства, такие как бета-актин и глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа (GAPDH), поскольку предполагается, что уровень их экспрессии остается постоянным при различных условиях обработки. К сожалению, это предположение не всегда справедливо, и результаты, основанные только на генах домашнего хозяйства, могут быть необъективными (Suzuki, Higgins, and Crawford 2000). Более эффективным методом является нормализация данных с помощью нашей кДНК qPCR Human Reference - единственного кДНК-контроля, полностью полученного из тканей человека.
эталонная кДНК qPCR Human является идеальным контролем для сравнения данных, полученных в различных экспериментах количественной ПЦР (qPCR). Поскольку она приготовлена из общего пула РНК, собранного из нескольких различных тканей, наша эталонная кДНК qPCR Human обеспечивает широкий охват генов, что подтверждается анализом микрочипов исходного материала РНК. РНК и, следовательно, кДНК, приготовленная из целых тканей, обеспечивает лучшее представление генов с меньшими вариациями, чем РНК, полученная из клеточных линий (данные не показаны). Более того, анализ ПЦР показывает, что наша тотальная РНК практически не содержит геномной ДНК. Это позволяет более точно измерить число копий транскриптов. Хорошо представлены как гены с высокой, так и с низкой концентрацией, что позволяет готовить широкий спектр серийно разбавленных стандартов для каждого анализа qPCR. Разброс между партиями эталонной кДНК минимален, поскольку источник РНК готовится в промышленных масштабах.
Обзор
Широкий охват генов
Практически не содержит геномной ДНК
---