Набор HTRF Human IFN-β Detection Kit - это иммуноферментный анализ, предназначенный для обнаружения и количественного определения человеческого IFN-β в супернатантах клеток в формате гомогенного анализа (без промывки и разделения).
Обзор
Интерфероны I типа, интерферон альфа (IFN-α) и интерферон бета (IFN-β), играют важную роль во врожденном иммунном ответе на вирусные инфекции. IFN-β вырабатывается фибробластами, макрофагами и дендритными клетками, а также эндолиальными клетками. Экспрессия гена IFN-β контролируется такими транскрипционными факторами, как IRF-3, c-Jun/ATF-2 и NF-kappaB, расположенными ниже по течению рецепторов распознавания образов, таких как Toll-подобные рецепторы. В частности, IFN-β является первичным функциональным показателем активации пути cGas-cGAMP-STING. После секреции IFN-β связывает и активирует рецепторный комплекс IFNAR1/IFNAR2, который опирается на транскрипционные факторы STAT1/2. Фосфорилированный STAT1/2 приводит к индукции экспрессии антивирусных генов.
Оценка образцов сыворотки часто требует повышенной чувствительности. В некоторых случаях чувствительность анализа AlphaLISA может быть достаточной для обнаружения низких уровней аналитов в сыворотке или плазме.
Принцип анализа
Клеточный супернатант, образец или стандарт дозируется непосредственно в планшет для определения с помощью реагентов HTRF® (384-луночный малообъемный белый планшет или Revvity малообъемный 96-луночный планшет в 20 мкл). Антитела, меченные донором и акцептором HTRF, предварительно смешиваются и добавляются за один шаг дозирования, что еще больше упрощает процедуру анализа. Анализ можно проводить в формате до 1536 лунок, просто пропорционально изменяя объем каждого добавления.
Анализ данных анализа
Для построения стандартной кривой ИФА обычно рекомендуется использовать 4-параметрическую логистическую кривую (4PL).
---