Этот HTRF-набор определяет клеточный STAT6 и может быть использован в качестве нормализационного анализа с нашим набором для определения фосфо-STAT6 для оптимального считывания JAK/STAT-сигнализации.
OverView
Набор для клеточного анализа Total STAT6 предназначен для мониторинга уровня экспрессии STAT6, как фосфорилированного, так и нефосфорилированного. Он совместим с нашим набором Phospho-STAT6 и позволяет анализировать фосфорилированные и общие белки из одного образца для более точного определения сигнального пути JAK/STAT.
Технические характеристики
Другие спецификации
Размер блока 500 точек пробы
Как это работает
Принцип работы анализа Total STAT6
Анализ Total STAT6 позволяет определить уровень экспрессии STAT6 в лизате клеток. В отличие от Вестерн-блота, этот анализ полностью основан на пластинах и не требует гелей, электрофореза или переноса. В анализе Total-STAT6 используются два меченых антитела: одно соединено с донорским флуорофором, другое - с акцепторным. Оба антитела высокоспецифичны к определенному эпитопу на белке. В присутствии STAT6 в клеточном экстракте добавление этих конъюгатов приводит флуорофор донора в непосредственную близость с акцептором и тем самым генерирует сигнал FRET. Его интенсивность прямо пропорциональна концентрации белка в образце и позволяет оценить экспрессию белка в формате анализа без промывки.
Протокол двухпланшетного анализа тотального STAT6
Двухпланшетный протокол предполагает культивирование клеток в 96-луночном планшете до лизиса, затем перенос лизатов в 384-луночный планшет для детекции малого объема перед добавлением реагентов для детекции Total-STAT6 HTRF. Этот протокол позволяет отслеживать жизнеспособность и конфлюэнтность клеток.
---