E-Cad. Стандарты или образцы добавляются в лунки микропланшета ELISA и соединяются со специфическим антителом. Затем в каждую лунку микропланшета последовательно добавляют биотинилированное детектирующее антитело, специфичное для Rat E-Cad, и конъюгат авидин-пероксидаза хрена (HRP) и инкубируют. Свободные компоненты смываются. В каждую лунку добавляется раствор субстрата. Только те лунки, которые содержат Rat E-Cad, биотинилированное детектирующее антитело и конъюгат авидин-HRP, окрасятся в синий цвет. Ферментно-субстратная реакция завершается добавлением стоп-раствора, и цвет становится желтым. Оптическая плотность (OD) измеряется спектрофотометрически при длине волны 450 нм ± 2 нм. Значение OD пропорционально концентрации Rat E-Cad. Вы можете рассчитать концентрацию Rat E-Cad в образцах, сравнив OD образцов со стандартной кривой.
Технические данные
Поскольку значения OD стандартной кривой могут варьироваться в зависимости от условий проведения анализа (например, оператор, техника пипетирования, техника промывки или влияние температуры), оператор должен построить стандартную кривую для каждого теста. Типичная стандартная кривая и данные приведены ниже только для справки.
Прецизионность
Внутрианалитическая точность (точность внутри анализа): 3 образца с низким, средним и высоким уровнем были протестированы 20 раз на одном планшете соответственно.
Межанализаторная точность (точность между анализами): 3 образца с низким, средним и высоким уровнем тестировались на 3 разных планшетах, по 20 реплик в каждом планшете, соответственно.
---