Измеряется по способности гидролизовать 5'-фосфатную группу субстрата аденозин-5'-монофосфата (AMP). Продукт ортофосфата определяется с помощью набора Malachite Green Phosphate Detection Kit. Удельная активность составляет >12 500 пмоль/мин/мкг, измеренная в описанных условиях.
N-концевая последовательность
Анализ - Trp27
Предсказанная молекулярная масса - 85 кДа
SDS-PAGE - 84-93 кДа в восстановительных условиях.
Свободный носитель
Что означает CF?
CF означает Carrier Free (CF). Обычно мы добавляем бычий сывороточный альбумин (BSA) в качестве белка-носителя к нашим рекомбинантным белкам. Добавление белка-носителя повышает стабильность белка, увеличивает срок хранения и позволяет хранить рекомбинантный белок в более разбавленной концентрации. Версия без носителя не содержит BSA.
Какая формула подойдет мне?
В целом, мы рекомендуем приобретать рекомбинантный белок с BSA для использования в культуре клеток или тканей, а также в качестве стандарта для ИФА. В отличие от этого, белок без носителя рекомендуется для применения в тех случаях, когда присутствие BSA может помешать.
Процедура анализа
Материалы
Пробирный буфер: 25 мМ Трис, 5 мМ MgCl2, pH 7,5
Рекомбинантная человеческая 5'-нуклеотидаза/CD73 Fc химера (rhCD73/mFc)
Субстрат: Аденозинмонофосфат (AMP), 5 мМ в деионизированной воде
Набор для определения фосфатов с помощью малахитового зеленого
96-луночный прозрачный планшет
Считыватель пластин с возможностью считывания абсорбции
Приготовьте стандартную кривую из 1 М фосфатного стандарта, добавив 10 мкл 1 М фосфатного стандарта к 990 мкл пробирного буфера для получения 10 мМ раствора. Добавьте 10 мкл 10 мМ фосфатного стандарта к 990 мкл пробирного буфера, чтобы получить 100 мкМ (это первое разведение для использования в качестве стандарта).
---