Набор для теста для исследований LS-K268

общий белокATPаденозинмонофосфат

5-АМФ-активируемая протеинкиназа (AMPK) является ключевым датчиком внутриклеточного энергетического баланса. AMPK активируется в ответ на увеличение соотношения AMP/ATP, которое может быть вызвано рядом факторов, таких как сокращение мышц, голодание или гипоксия. AMPK представляет собой гетеротримерный белковый комплекс, состоящий из альфа- (63 кДа), бета- (38 кДа) и гамма- (38 кДа) субъединиц. Для каждой субъединицы идентифицированы изоформы (альфа-1, альфа-2, бета-1, бета-2, гамма-1, гамма-2, гамма-3), которые теоретически позволяют образовать 12 различных белков. Альфа-субъединица содержит серин/треониновый киназный домен, а регуляторные субъединицы - сайты связывания AMP и ATP, а также гликогена. AMPK активируется путем фосфорилирования Thr-172 в каталитическом домене. Связывание AMP приводит к увеличению активности AMPK в 2-5 раз по сравнению с базальным уровнем. Связывание AMP с альфа-субъединицей приводит к аллостерической активации киназы и вызывает конформационное изменение в киназном домене, которое защищает AMPK от дефосфорилирования Thr-172. Этот клеточный ИФА измеряет фосфорилированный AMPK в целых клетках и нормирует сигнал на общее содержание белка. Антитело распознает обе альфа-субъединицы и, таким образом, может быть использовано для клеток из всех тканей (человека, мыши, крысы). Этот простой и эффективный анализ исключает необходимость подготовки клеточного лизата и может быть использован для изучения регуляции AMPK в краткосрочных и долгосрочных анализах. В этом анализе клетки, выращенные в 96-луночных планшетах, фиксируются и пермеабилизируются в лунках. Фосфорилирование AMPK (pAMPK) измеряется с помощью флуоресцентного ELISA с последующим измерением общего белка в каждой лунке.