Одним из наиболее важных моментов перед проведением двумерного гель-электрофореза является выбор буфера для солюбилизации белков. Подходящий буфер должен эффективно солюбилизировать белки, не нарушая их нативного заряда.
Мочевина, обычный хаотроп, широко используется для солюбилизации и денатурации белков. Одним из недостатков использования мочевины является карбамилирование. В воде мочевина существует в равновесии с цианатом аммония, уровень которого увеличивается при повышении температуры и pH. Цианат реагирует с α-амино- и ε-аминогруппами белков и вызывает изменение изоэлектрической точки белков. Это приводит к артефактным результатам. Поэтому карбамилирования следует избегать
Одним из способов минимизации риска карбамилирования является приготовление свежих реагентов на основе мочевины перед каждым использованием. Компания G-Biosciences разработала серию сухих буферов для солюбилизации на основе мочевины, предварительно смешанных и готовых к использованию. Просто добавьте соответствующий объем поставляемого буфера для регидратации к сухому буферу. Затем используйте для солюбилизации белков, экономя время и улучшая качество гель-электрофореза IEF/2D (заявка на патент).
Буферы для экстракции FOCUS™ также предназначены для использования в качестве регидратационных буферов для полосок IPG
FOCUS™ Extraction Buffers - это экспериментально оптимизированные концентрации критических, буферных и стабилизирующих агентов, включая мочевину, тиомочевину, Nonidet® P-40, CHAPS и сульфобетаины. Буферы для экстракции FOCUS™ разработаны для оптимальной экстракции белков и улучшения разрешения пятен при анализе 2D гелей.
---