Набор для теста для онкологии EG-90068-NGS

на желудочно-кишечные заболеваниягеныкрови

Наборы EliGene® NGS позволяют проводить мультиплексную ПЦР-амплификацию всех необходимых целевых областей интересующего гена (генов). Рекомендуемое количество ДНК для каждой реакции мультиплексной ПЦР составляет от 20 до 100 нг ДНК, полученной из формалин-фиксированного парафинированного материала (FFPE) или из крови. Затем полученные ампликоны штрихкодируются последовательностями MID и смешиваются в один образец. Этот образец количественно оценивается и секвенируется с помощью NGS-прибора Illumina для массивно-параллельного секвенирования (MPS) в соответствии с инструкциями производителя. Полученные чтения последовательностей впоследствии анализируются путем сравнения с референсной последовательностью целевого гена (генов) для выявления позиций вариантов. Введение Наборы EliGene® NGS используются для проведения одной или нескольких мультиплексных ПЦР-реакций, в результате которых амплифицируются целевые участки одного образца. Для амплификации используется готовая к применению мастер-микс, содержащая ДНК-полимеразу с горячим стартом. Полученные ампликоны каждого мультиплекса разводятся в 100 раз. На втором этапе проводится второй раунд ПЦР с использованием набора EliGene® Adaptor-IL NGS, что позволяет пометить все ампликоны для включения в них MID и адаптеров p7 и p5, необходимых для секвенирования Illumina MiSeq. Полученные меченые ампликоны смешиваются по отдельности по заранее заданной схеме смешивания, специфичной для каждого анализа. Затем каждая библиотека ампликонов очищается от небольших остаточных фрагментов ДНК длиной менее 150 п.н., и концентрация ДНК определяется с помощью ПЦР в реальном времени со стандартами концентрации.