Набор DRG C5a ELISA Kit представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), основанный на принципе сэндвича.
В связи с перекрестной реактивностью моноклональных антител с фактором комплемента С5, С5 в образце перед анализом удаляется путем преципитации. Полученный в результате прозрачный супернатант содержит C5a, который необходимо определить (10,11). Во время первой инкубации C5a в образце связывается с мышиными моноклональными антителами против C5a (mab 561), которые прикреплены к поверхности пластины для микротитрования. Затем несвязанные компоненты удаляются путем промывки, и во второй реакции добавляются конъюгированные с пероксидазой моноклональные антитела (Mab 557), которые связываются с другим эпитопом C5a. Избыток конъюгированных с ферментом антител удаляется путем промывки; затем определяется активность связанного фермента. Ферментативная реакция между перекисью водорода и хромогеном завершается добавлением разбавленной серной кислоты.
Интенсивность окраски, которая пропорциональна концентрации C5a, определяется фотометрически.
Иммуноферментный анализ для количественного измерения анафилатоксина С5а в плазме или моче человека. Система комплемента состоит из более чем 20 белков, которые развивались как система защиты от вторжения микроорганизмов. Она также может активироваться при различных заболеваниях или при контакте с медицинскими приборами или лекарствами (1). При активации системы каскад протеолитических ферментов высвобождает анафилатоксины C3a, C4a и C5a из их соответствующих предшественников (2). Эти фрагменты выполняют различные биологические функции, такие как высвобождение гистамина, сокращение гладких мышц, увеличение проницаемости капилляров или иммуномодуляция (3).
---