Плотность мононуклеарных клеток (лимфоцитов и моноцитов) в периферической крови составляет 1,075-1,090 г/мл, что отличается от плотности эритроцитов, многоядерных лейкоцитов и тромбоцитов. Плотность эритроцитов и гранулоцитов относительно велика (около 1.поэтому среда для разделения лимфоцитов человека используется для создания определенного градиента плотности, и разбавленная цельная кровь плавно переливается на среду для разделения. После центрифугирования эритроциты и гранулоциты опускаются на дно пробирки из-за их большой плотности; поскольку их плотность меньше или равна плотности среды разделения, лимфоциты и моноциты находятся на поверхности среды разделения. Также может присутствовать небольшое количество клеток, взвешенных в разделительной среде. Отсасывая клетки на поверхности разделительной среды, можно выделить мононуклеарные клетки из периферической крови.
Эта серия продуктов имеет ряд преимуществ, таких как быстрое и простое использование, отсутствие цитотоксичности, высокий выход клеток и хорошая жизнеспособность.
Устранение неполадок
Оптимальная температура разделения составляет (20±5)℃, при превышении которой эффект разделения будет нарушен. Предварительно прогрейте среду разделения до комнатной температуры (20±5℃) и осторожно встряхните перед использованием. Не используйте среду для разделения непосредственно из холодильника.
Изотоническая среда (PBS или 0,9% NaCl), используемая для разведения антикоагулированной крови, должна быть стерильной и может быть заменена средой RPMI-1640.
разведение крови 1:1 может уменьшить коагуляцию эритроцитов и увеличить количество собранных лимфоцитов.
---