Библиотека S. cerevisiae VENUS-fusion Library состоит из штаммов, экспрессирующих два фрагмента (VN или VC) флуоресцентного белка VENUS, присоединенных к С-концу каждого белка. Взаимодействие двух белков может быть легко и быстро проанализировано для всех белков дрожжей, а взаимодействие между белками, экспрессированными в естественном состоянии, может быть проанализировано с использованием собственного промотора в клетке.
Особенности и преимущества
Анализ белковых взаимодействий и внутриклеточной локализации в живых клетках
Простое наблюдение, возможное только с помощью флуоресцентного микроскопа
Легко изучать функцию и взаимодействие неизвестных новых белков
Возможен анализ протеинилирования (убиквитинирование, сумоилирование, неддилирование и т.д.)
Обзор
Библиотека S. cerevisiae VENUS-fusion была разработана в Сеульском национальном университете (Библиотека VN-fusion: Genome Res. 2013. 23:736-746 & VC-fusion Library: Genome Res. 2019. 29:135-145). Компания Bioneer владеет их эксклюзивной лицензией. Библиотека VENUS-fusion состоит из штаммов S. cerevisiae, экспрессирующих ORF, содержащую каждый фрагмент VENUS (VN и VC) на С-конце. Слитый белок VN/VC был вставлен в дрожжевую хромосому путем гомологичной рекомбинации и экспрессирован с помощью собственного промотора. Библиотека VN состоит из 5809 штаммов, а библиотека VC - из 5552 штаммов, охватывая более 90% протеома S. cerevisiae. .
Принцип
Бимолекулярная флуоресцентная комплементация (BiFC) Assay
В методе бимолекулярной флуоресцентной комплементации (BiFC) флуоресцентный белок (VENUS) разделяется на N-концевой (VN) и C-концевой (VC) фрагменты, а затем присоединяется к каждому из двух белков, с которыми необходимо взаимодействовать, и экспрессируется.
---