Этот метод модифицирован на основе Diff-Quick и Wright-Giemsa stain, рекомендованных ВОЗ. Он предназначен для окрашивания морфологии сперматозоидов, цитологии спермы и цитологии предстательной железы.
Принцип:
Белки с различными изоэлектрическими точками в сперматозоидах и клетках несут различные заряды при одинаковом pH и, таким образом, избирательно связываются с различными красителями. Амидо, высвобожденные из ацидофильных белков, несут положительный заряд и связываются с кислотным красителем (эозином), окрашиваясь в красный цвет. Карбоксилы, высвобождающиеся из базофильного белка, несут отрицательный заряд и связывают щелочной краситель (метиленовый синий), окрашивая его в синий цвет. Белки нейтрофилов, чьи положительные заряды освобожденных амидо эквивалентны отрицательным зарядам освобожденных карбоксилов, связывают одновременно и кислотное, и щелочное окрашивание и окрашиваются в сиреневый цвет. Однако, поскольку освобожденные заряды равны, пятно получается слабым. Буфер может предотвратить интерференцию кислотных и щелочных веществ для получения удовлетворительного результата.
Методы:
Центрифугируйте разжиженные сперматозоиды в течение 8 минут (500 об/мин) и удалите супернатант. Промойте осадок изотоническим солевым раствором 2~3 раза по 5 минут (2 000 об/мин). Для образцов с большим количеством сперматозоидов возьмите разжиженные сперматозоиды со дна пробирки, промойте и центрифугируйте изотоническим солевым раствором 2~3 раза.
Добавьте изотонический солевой раствор, чтобы ресуспендировать осадок, выпавший при центрифугировании после промывки. Выдавите на срез в соответствии с методом выдавливания кровяной пленки. Высушите на воздухе или с помощью вентиляции.
Покройте мазок 1~2 каплями пятна А на 15~20 секунд (в это время пятно может высохнуть).
Смойте пятно А фосфатным буфером M/15, затем ненадолго отбросьте буфер.
---