В данном наборе для ИФА используется принцип сэндвич-ИФА. Микропланшет для ИФА, входящий в состав набора, предварительно покрыт антителом, специфичным для мышиного IL-4. Образцы (или стандарты) добавляются в лунки микропланшета и соединяются со специфическим антителом и биотинилированным антителом обнаружения, специфичным для мышиного IL-4. Затем конъюгат авидин-пероксидаза хрена (HRP) последовательно добавляют в каждую лунку микропланшета и инкубируют. Свободные компоненты смываются. В каждую лунку добавляют раствор субстрата. Только те лунки, которые содержат мышиный IL-4, биотинилированное детектирующее антитело и конъюгат авидин-HRP, окрасятся в синий цвет. Ферментно-субстратная реакция завершается добавлением стоп-раствора, и цвет становится желтым. Оптическая плотность (OD) измеряется спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Значение OD пропорционально концентрации мышиного IL-4. Вы можете рассчитать концентрацию мышиного IL-4 в образцах, сравнив OD образцов со стандартной кривой.
Технические данные
Поскольку значения OD стандартной кривой могут варьироваться в зависимости от условий проведения анализа (например, оператор, техника пипетирования, техника промывки или влияние температуры), оператор должен построить стандартную кривую для каждого теста. Типичная стандартная кривая и данные приведены ниже только для справки.
Прецизионность
Внутрианалитическая точность (точность внутри анализа): 3 образца с низким, средним и высоким уровнем были протестированы 20 раз на одном планшете соответственно.
Межанализаторная точность (точность между анализами): 3 образца с низким, средним и высоким уровнем тестировались на 3 разных планшетах, по 20 реплик в каждом планшете, соответственно.
---