Реактив фермент A018 series

фермент УДГдля ОТ-ПЦРбактерии

Термогенный фермент UDG (урацил-ДНК гликозилаза) проходит скрининг, выделяется и очищается из выращенных в лаборатории бактерий и, подобно UNG из E. coli, гидролизует урацил-гликозидные связи в одно- или двухцепочечной ДНК, эксцилирует урацил и создает чувствительные к щелочи неосновные сайты в ДНК. Эти безосновные сайты могут быть гидролизованы эндонуклеазой нуклеиновой кислоты, нагреванием или обработкой щелочью, и, в отличие от UNG из E. coli, фермент проявляет низкую термическую стабильность, что повышает вероятность его инактивации. В зависимости от способа подготовки ДНК ферменты UDG могут быть использованы для достижения общего сайт-специфического или странд-специфического расщепления U-ДНК. Определение единицы Одна единица определяется как количество урацил-ДНК гликозилазы, необходимое для полной деградации 1 мкг очищенной одноцепочечной урацил-ДНК (M13) в течение 60 минут при 37°C.【 Особенности продукта】 Участки U-ДНК на одно- и двухцепочечной ДНК могут быть гидролизованы, гликозидные связи урацила могут быть разорваны, а в ДНК могут быть созданы чувствительные к щелочи свободные от оснований участки. ♦ Активен в отношении как одноцепочечной, так и двухцепочечной ДНК. ♦ Неактивен для РНК и ДНК, в которых урацил отсутствует в естественном виде. ♦ Не предъявляют требований к ионам металлов и полностью активны в присутствии ЭДТА. Однако остаточная активность в системах, превышающих 100 мМ K+ или Na+, составляет приблизительно 70% от исходной активности, и требуется более интенсивное использование. ♦ Оптимальной температурой реакции является 37 °С, но он обладает лучшей активностью в широком диапазоне 20-50 °С, а при 95 °С может быть полностью инактивирован в течение 2 минут. ♦ Рекомендуемое количество использования в ПЦР - 0,2U-1U/25 мкл, а рекомендуемое количество использования в одностадийной RT-qPCR и 55-65°C - не более 0,2U/25 мкл,