Эндонуклеаза T7 I распознает и расщепляет неидеально совпадающую ДНК, крестообразные структуры ДНК, структуры или перекрестки Холлидея, гетеродуплексную ДНК и более медленно - никелированную двуцепочечную ДНК. Местом расщепления является первая, вторая или третья фосфодиэфирная связь, расположенная в 5´ от несоответствия.
Введение
Эндонуклеаза Magigen T7 может использоваться для обнаружения мутации генов, SNP, TALEN или CRISPR / cas9 мутантов, идентификации несовпадающей ДНК, а также для разрешения четырехстороннего перекреста ДНК или разветвленной ДНК. Обнаружение гетеродуплекса или расщепление ДНК; используется для произвольного разрезания линейной ДНК для дробного клонирования и т.д.
Определение единицы
Количество фермента, необходимое для преобразования pUC (AT)* крестообразной структуры 90% или более в линейную структуру более 90% в 50 мкл реакционной системы при 37°C в течение 1 часа, определяется как одна единица активности.
Характеристики продукта
T7 эндонуклеаза I является субстратным структурно-селективным ферментом, который проявляет различную активность расщепления для разных субстратов ДНК. Поэтому при разрезании конкретного субстрата необходимо исследовать и контролировать количество фермента и время реакции.
---