набор 2-D Quant Kit предназначен для точного определения концентрации белка в образцах, подготовленных для таких методов электрофореза, как 2-D электрофорез, SDS-PAGE или IEF.
Обзор
набор 2-D Quant Kit предназначен для точного определения концентрации белка в образцах, подготовленных с помощью таких методов электрофореза, как 2-D электрофорез, SDS-PAGE или IEF.
Точное определение концентрации белка в присутствии 2% SDS, 1% DTT, 8 М мочевины, 2 М тиомочевины, 4% CHAPS, 2% Pharmalyte и 2% IPG Buffer.
Количественно осаждает белки, оставляя при этом мешающие вещества.
Линейный отклик в диапазоне от 0 до 50 мкг белка при рекомендуемых объемах образца от 1 до 50 мкл.
Обычные спектрофотометрические методы количественного определения белка основаны либо на связывании красителя Кумасси, либо на катализируемом белками восстановлении иона меди (Cu2+) до иона меди (Cu+). Анализы, связывающие краситель, нельзя использовать в присутствии реагентов, которые также связывают краситель. К ним относятся амфолиты-носители и детергенты, такие как PlusOne CHAPS, SDS и Triton X-100.
Анализы, зависящие от восстановления иона меди, нельзя использовать в присутствии восстановителей, таких как DTT, или в присутствии реагентов, образующих комплексы с ионом меди, таких как тиомочевина или EDTA.
Процедура 2-D Quant Kit работает путем количественного осаждения белков, оставляя при этом мешающие вещества. Анализ основан на специфическом связывании ионов меди с белком. Осажденные белки ресуспендируются в медьсодержащем растворе, а количество несвязанной меди измеряется с помощью колориметрического реагента. Поглощение при 480 нм находится в обратной зависимости от концентрации белка.
---