Набор реактивов в растворе 12-008-60

кольцемидHBSSгипотонический

Метод кариотипирования клеток крови был разработан для получения информации о хромосомных аномалиях. Клетки лимфоцитов обычно не подвергаются последующим клеточным делениям. В присутствии митогена лимфоциты стимулируются к вступлению в митоз путем репликации ДНК. Через 48-72 часа в культуру добавляют ингибитор митоза, чтобы остановить митоз на стадии метафазы. После обработки гипотоническим раствором, фиксации и окрашивания хромосомы можно микроскопически наблюдать и оценивать на наличие отклонений. Анализ высокого разрешения - это специальная манипуляция обычной процедуры кариотипирования крови, предназначенная для получения большого количества митотических фигур в поздней профазе или прометафазе. На этой стадии митоза хромосомы длиннее и менее конденсированы. После G-бэндинга хромосомы демонстрируют более высокий уровень разрешения полос, не встречающийся в обычном анализе. Высокое разрешение позволяет провести более детальный анализ кариотипа. Культуры могут быть синхронизированы путем добавления метотрексата (MTX), ингибитора биосинтеза тимидина, который блокирует клетки в S-фазе (синтез ДНК) клеточного цикла. Через 16-18 часов большинство делящихся клеток в культуре находятся в S-фазе. Если в культуру добавить тимидин, блок MTX высвобождается, и клетки синхронно переходят к митозу, после чего можно добавить колцемид. Очень короткая обработка колцемидом в сочетании с этим методом может быть использована для получения расширенных прометафазных хромосом при подозрении на небольшие делеции или перестройки. Материалы Метотрексат (аметоптерин), 10-5М в HBSS: 4 флакона по 1,5 мл каждый Тимидин, 10-3М в дистиллированной воде: 4 пробирки по 1,5 мл